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| ¿COMO DETECTAR EL SÍNDROME X FRÁGIL? | ¿DONDE HACER EL ANÁLISIS EN NUESTRO PAÍS? |
DETECCIÓN DEL SÍNDROME X FRÁGIL:
Al
igual que muchos test de ADN, el análisis del ADN en el X frágil utiliza el
hecho de que el ADN tiene una doble cadena y una cadena de un gen se une específicamente
a la otra. El gen FMR-1 de una persona sometida al test puede
"verse" pegándolo a un fragmento purificado del gen FMR-1 marcado
con una sustancia radiactiva. Este fragmento de gen recibe el nombre de
"sonda" y la leve señal radiactiva que emite permite visualizar el
gen al que va unida tras exposición a una película de rayos X.
Análisis
con la técnica de Southern. Una parte del ADN aislado de la muestra se corta
en pedazos de muchos tamaños, utilizando ciertas enzimas (tijeras biológicas)
que reconocen y cortan determinadas secuencias de ADN. Entre los millones de
fragmentos de ADN que se producen hay algunos que contiene la sección del gen
FMR-1 con la repetición de CGG. Cuando no hay mutación, estos fragmentos de
FMR-1 son de un solo tamaño conocido. Si existe la mutación, los fragmentos
son más largos. Además, los fragmentos del gen FMR-1 que están metilados
pueden distinguirse por su tamaño de los que no están metilados porque una
de las enzimas utilizadas no puede cortar si hay metilación.
Todos
los fragmentos de ADN de la mezcla se separan por tamaños utilizando una
corriente eléctrica para hacerlos pasar a través de un material gomoso
poroso (hecho de un componente de las algas) llamado gel. Cada muestra de ADN
se introduce en un pocillo en la parte superior del gel y baja por una
"calle" estrecha del gel. Los fragmentos cortos van más rápidamente
y mas lejos que los largos. La larga extensión de fragmentos de ADN (tira)
resultante puede verse aplicándole un colorante de color naranja brillante.
En este punto, los fragmentos de FMR-1 son indistinguibles de los demás
fragmentos de ADN.
La
tira de fragmentos de ADN se traspasa por absorción a una hoja fina de papel
de nylon, que se empapa con una sonda del gen FMR-1 marcada con una sustancia
radiactiva. La sonda reconoce los fragmentos coincidentes del gen FMR-1, a los
que se une estrechamente. La exposición de la hoja de nylon a la película de
rayos X produce unas líneas (llamadas "bandas")
cortas horizontales de color negro en la película que se corresponden con las
posiciones de los fragmentos del gen FMR-1 del paciente. Estas bandas crean un
patrón vertical que es diferente en función de la presencia o ausencia de
una mutación, del tipo de mutación, del estado de metilación y del sexo del
paciente. Al final de este artículo, el esquema titulado "Análisis del
X frágil por la técnica de southern" representa algunos ejemplos de
estos patrones. También pueden encontrarse muchos patrones inusuales no
incluidos aquí.
Es
necesario tener precaución al interpretar un patrón que sugiera la
existencia de una pequeña premutación. Puede verse una ligera separación de
dos bandas no metiladas cuando dos alelos normales o un alelo normal y otro de
"zona gris" tienen tamaños significativamente diferentes. Para
determinar exactamente el número de repeticiones de CGG en alelos con
premutación o en zona gris, es necesario el análisis con PCR.
Análisis
con PCR: El análisis con PCR para el X frágil supone generar un millón de
copias de una pequeña parte del gen FMR-1 del paciente, que contenga la
repetición de CGGs. Los fragmentos resultantes de ADN (conocidos como
productos de PCR) son mucho más cortos que los analizados por la técnica de
Southern y pueden detectarse diferencias de tamaño mucho menores. Después de
su separación en un gel, pueden distinguirse fragmentos de longitud diferente
por una sola repetición de CGG. Esta es la razón por la que el análisis con
PCR permite realizar una determinación bastante exacta del número de
repeticiones de CGG para alelos normales y premutaciones. Una forma eficaz de
visualizar los productos PCR del FMR-1 es utilizar una sonda que se una a la
cadena de repeticiones de CGG. La exposición a la película de rayos X
produce una o dos bandas o ninguna. Al final de este artículo, el esquema
titulado "Análisis del X frágil por PCR" ilustra el aspecto de
estas bandas y ofrece varios ejemplos de resultados.
Como norma, el análisis con PCR no detecta las mutaciones completas de manera fiable, así que la ausencia de una banda sugiere una mutación completa en un varón. La presencia de la mutación completa debe confirmarse con la técnica de absorción de southern. En una mujer con mutación completa, el resultado de la PCR parece igual (una sola banda) que en otra con dos alelos normales con el mismo número de repeticiones de CGG. De nuevo, es esencial obtener resultados complementarios con el análisis de Southern.
Donde realizar el Análisis en la República Argentina:
Si opta por esta opción, hemos acordado que la gestión debe realizarse a través de la Asociación Síndrome X Frágil de Argentina (TE: 011-4
313-1846), para luego formalizar el pedido a la FUNDACIÓN GENOS , trámite del cual nos encargamos personalmente para que la familia en cuestión acceda a este costo diferencial.El paciente acude a la extracción con la autorización en manos de la FUNDACIÓN.LA MUESTRA DE SANGRE PUEDE SER REMITIDA SIN INCONVENIENTE A BUENOS AIRES - FUNDACIÓN GENOS - F. ACUÑA DE FIGUEROA 731 - CIUDAD DE BUENOS AIRESDebe contener mínimamente 5 cm3 de sangre tratada con EDTA (anticoagulante)( dos gotas de EDTA para 5 cm3 de sangre) y puede mantenerse a temperatura ambiente hasta un MÁXIMO de 48 horas.
Se recomienda remitirla en envase térmico con refrigerante para una mayor seguridad de la muestra.
Los beneficiarios de este análisis deben hacer la misma gestión de autorización previa para acceder al costo anteriormente expuesto.
Cabe mencionar que esta fundación realiza el Estudio Molecular, y tienen un cupo para personas sin recursos a las cuales les hacen el estudio sin cargo. SUSPENDIDO
mail: labadn@fcm.uncu.edu.ar
TE: 261- 4494213
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